Πόσο συχνά αισθάνεστε ταραγμένοι, εύκολα αναστατωμένοι και νευρικοί μεταξύ των γευμάτων; Πόσο συχνά εξαρτάστε από τον καφέ για να συνεχίσετε; Πόσο συχνά δυσκολεύεστε να συγκεντρωθείτε πριν φάτε; Η φλεγμονή είναι μια ουσιαστική αντίδραση του ανθρώπινου σώματος. Πυροδοτείται από το ανοσοποιητικό σύστημα για να μας προστατεύσει από τραυματισμό, μόλυνση ή/και ασθένεια. Ωστόσο, τι συμβαίνει εάν υπάρχει υπερβολική φλεγμονή στο ανθρώπινο σώμα; Και, τι συμβαίνει εάν υπάρχει υπερβολική φλεγμονή στον εγκέφαλο;  

 

Η νευροφλεγμονή μπορεί να προκαλέσει μια ποικιλία προβλημάτων υγείας, όπως άγχος, στρες, κατάθλιψη, ομίχλη του εγκεφάλου, κόπωση, ακόμη και λήθαργο, μεταξύ άλλων γνωστών συμπτωμάτων. Ευτυχώς, υπάρχει μια φυσική θεραπεία που μπορεί να βοηθήσει στη μείωση της φλεγμονής και στη βελτίωση της λειτουργίας του εγκεφάλου. Σύμφωνα με ερευνητικές μελέτες, η κουρκουμίνη μπορεί να βοηθήσει στην καταπολέμηση της νευροφλεγμονής. Ο σκοπός του παρακάτω άρθρου είναι να συζητήσει τις αντιφλεγμονώδεις επιδράσεις της κουρκουμίνης στη μικρογλοία, την υγεία του εγκεφάλου και την ευεξία.  

 

Αντιφλεγμονώδεις επιδράσεις της κουρκουμίνης σε μικρογλοιακά κύτταρα

 

Περίληψη

Το λιποτεϊχοϊκό οξύ (LTA) διεγείρει νευροφλεγμονώδη μόρια, συμβάλλοντας στην παθογένεση νευροεκφυλιστικών ασθενειών. Ως εκ τούτου, η καταστολή των νευροφλεγμονωδών μορίων θα μπορούσε να αναπτυχθεί ως θεραπευτική μέθοδος. Αν και τα προηγούμενα δεδομένα υποστηρίζουν μια ανοσοτροποποιητική επίδραση της κουρκουμίνης, τα υποκείμενα μονοπάτια σηματοδότησης είναι σε μεγάλο βαθμό άγνωστα. Εδώ, διερευνήσαμε τις αντινευροφλεγμονώδεις ιδιότητες της κουρκουμίνης σε μικρογλοιακά κύτταρα BV-2 που διεγείρονται από LTA. Φλεγμονώδης παράγοντας νέκρωσης όγκου κυτοκίνης-; Η έκκριση [TNF-α, προσταγλανδίνης Ε2 (PGE2) και μονοξειδίου του αζώτου (ΝΟ] σε μικρογλοιακά κύτταρα που προκαλούνται από LTA ανεστάλησαν από την κουρκουμίνη. Η κουρκουμίνη ανέστειλε επίσης τις επαγόμενες από LTA συνθάσες ΝΟ (iNOS) και την κυκλοοξυγενάση-2 (COX-2) Στη συνέχεια, οι μηχανιστικές μας μελέτες αποκάλυψαν ότι η κουρκουμίνη ανέστειλε την επαγόμενη από LTA φωσφορυλίωση της ενεργοποιημένης από μιτογόνο πρωτεϊνική κινάση (MAPK) συμπεριλαμβανομένων των ERK, p38, Akt και μετατόπιση του NF-βB. Επιπλέον, η επαγόμενη από κουρκουμίνη αιμοοξυγενάση (HO)-1HO- Έκφραση παράγοντα 1 (Nrf-2) που σχετίζεται με τον ερυθροειδές παράγοντα 2 (Nrf-2). Η αναστολή του HO-1 ανέστρεψε την ανασταλτική επίδραση του HO-1 στους φλεγμονώδεις μεσολαβητές που απελευθερώνονται σε μικρογλοιακά κύτταρα που διεγείρονται από LTA. Συνολικά, τα αποτελέσματά μας προτείνουν ότι η κουρκουμίνη θα μπορούσε να είναι ένας πιθανός θεραπευτικός παράγοντας για τη θεραπεία νευροεκφυλιστικών διαταραχών μέσω της καταστολής των νευροφλεγμονωδών αποκρίσεων.   Λέξεις-κλειδιά: κουρκουμίνη, νευροφλεγμονή, TLR2, HO-1, μικρογλοιακά κύτταρα  

 

Εισαγωγή

Η χρόνια νευροφλεγμονή παίζει σημαντικό ρόλο σε διάφορες νευροεκφυλιστικές ασθένειες, συμπεριλαμβανομένης της AD, της νόσου του Parkinson (PD), της νόσου του Huntington (HD), του εγκεφαλικού επεισοδίου, της αμυοτροφικής πλευρικής σκλήρυνσης (ALS) και της σκλήρυνσης κατά πλάκας (Spangenberg and Green, 2017). Η νευροφλεγμονή παρεμποδίζεται από την ενεργοποίηση της μικρογλοίας, των πρωταρχικών τελεστών κυττάρων και των εγκατεστημένων ανοσοκυττάρων του ΚΝΣ (Nakagawa and Chiba, 2015). Τα μικρογλοιακά κύτταρα μπορούν να ενεργοποιηθούν ως απόκριση σε νευρωνικό θάνατο ή νευρωνική βλάβη που προκαλείται από νευροφλεγμονώδεις αποκρίσεις ή από εξωκυτταρικές τοξίνες, όπως βακτήρια και παθογόνα (Larochelle et al., 2015). Στη νευροφλεγμονή, η ενεργοποιημένη μικρογλοία απελευθερώνει διάφορα είδη κυτοκινών, χημειοκινών, δραστικών ειδών οξυγόνου και δραστικών ειδών αζώτου για την ανάπτυξη και διατήρηση φλεγμονωδών αποκρίσεων (Moss and Bates, 2001). Η υπερβολική παραγωγή αυτών των φλεγμονωδών μεσολαβητών θα μπορούσε να προκαλέσει νευρωνική βλάβη και θάνατο. Τα συσσωρευμένα στοιχεία υποδηλώνουν ότι ο έλεγχος της μικρογλοιακής ενεργοποίησης θα μπορούσε να μετριάσει τη σοβαρότητα της νευροεκφυλιστικής νόσου (Perry et al., 2010). Ως εκ τούτου, η ανάπτυξη αντι-νευρο-φλεγμονωδών παραγόντων για την αναστολή της μικρογλοιακής ενεργοποίησης θα μπορούσε να είναι ευεργετική για τη θεραπεία νευροεκφυλιστικών ασθενειών.  

 

Η μικρογλοία εκφράζει υποδοχείς αναγνώρισης προτύπων (PRR) που μπορούν να συνδεθούν με μοριακά μοτίβα που σχετίζονται με μοτίβα (PAMPs) και μοριακά μοτίβα που σχετίζονται με βλάβη (DAMPs) όπως ο λιποπολυσακχαρίτης (LPS) και το λιποτεϊχοϊκό οξύ (LTA), αντίστοιχα (Jack et al., 2005 ). Τα TLR, μια κύρια κατηγορία PRR, διαδραματίζουν κρίσιμο ρόλο στην άμυνα του ξενιστή προκαλώντας έμφυτες ανοσολογικές αποκρίσεις. Όλο και περισσότερο, οι μελέτες έχουν δείξει ότι ο αγωνιστής TLR2 LTA εμπλέκεται στην παθογένεση των μολυσματικών ασθενειών του ΚΝΣ και μπορεί να προκαλέσει νευρωνική βλάβη (Neher et al., 2011). Η αναστολή της ενεργοποίησης του TLR2 εξασθενεί την ενεργοποίηση των μικρογλοιακών κυττάρων και το αμυλοειδές ? συσσώρευση στον εγκέφαλο (McDonald et al., 2016; Hossain et al., 2017). Η μεταγωγή σήματος μέσω TLR2 διαμεσολαβείται από διαφορετικές πρωτεΐνες προσαρμογέα, συμπεριλαμβανομένης της MyD88, η οποία προάγει τη μετάδοση σηματοδότησης μέσω MAPK και NF-βB ενεργοποίησης που οδηγεί στην έκφραση φλεγμονωδών μεσολαβητών (Larochelle et al., 2015).  

 

Τα φλεγμονώδη και οξειδωτικά μόρια είναι πολύ ισχυροί ενεργοποιητές του Keap-Nrf2 (NF-E2-σχετιζόμενος παράγοντας 2), ο οποίος επάγει την έκφραση των ενζύμων αποτοξίνωσης Φάσης ΙΙ για προσαρμογή στην κατάσταση του οξειδωτικού στρες (Rojo et al., 2010). Συνήθως, το Nrf2 δρα σε ανενεργή μορφή. Κατά τη διέγερση, το Nrf2 διαχωρίζεται από το Keap1 και μετατοπίζεται στον πυρήνα, όπου συνδέεται με το στοιχείο αντιοξειδωτικής απόκρισης (ARE) για να ενεργοποιήσει τη μεταγραφή των αντιοξειδωτικών γονιδίων για κυτταροπροστασία (Ma, 2013; Cho et al., 2015). Ένα από τα γονίδια που ρυθμίζονται από το Nrf2 είναι η οξυγενάση της αίμης-1 (HO-1), η οποία έχει μια αλληλουχία ARE στην περιοχή προαγωγέα της. Πρόσφατα, το HO-1 έχει αναφερθεί ότι είναι ένας κυρίαρχος παράγοντας στον έλεγχο του οξειδωτικού στρες και των φλεγμονωδών αποκρίσεων σε νευροεκφυλιστικές ασθένειες (Schipper et al., 2009). Το HO-1 είναι το πρώτο επαγώγιμο ένζυμο περιορισμού του ρυθμού στην αποικοδόμηση της αίμης σε υποπροϊόντα. Το HO-1 μπορεί να παρέχει νευροπροστασία ή νευροτοξική δράση λόγω της ισορροπίας μεταξύ των ευεργετικών και τοξικών επιδράσεων της αίμης και των προϊόντων αίμης (Mancuso et al., 2010). Ένα υποπροϊόν του HO-1, η χολερυθρίνη, έχει αποδειχθεί ότι προστατεύει τους νευρώνες από το οξειδωτικό στρες in vivo και in vitro. Η χολερυθρίνη μπορεί να οξειδωθεί σε μπιλιβερδίνη με τον καθαρισμό των ριζών υπεροξυλίου (Chen, 2014). Έχει προταθεί ότι το HO-1, η μπιλιβερδίνη και το CO έχουν αντιφλεγμονώδεις ιδιότητες (Jazwa and Cuadrado, 2010). Μια άλλη μελέτη έχει προτείνει ότι τα ποντίκια που δεν είχαν HO-1 ήταν ευάλωτα σε προφλεγμονώδη ερεθίσματα και ανέπτυξαν χρόνια φλεγμονή λόγω μειωμένων επιπέδων σιδήρου (Chora et al., 2007). Επιπλέον, μια πρόσφατη μελέτη πρότεινε ότι η προς τα πάνω ρύθμιση των οδών Nrf2 και HO-1 ανέστειλε σημαντικά τη φλεγμονώδη αντίδραση στην ενεργοποιημένη μικρογλοία (Kim et al., 2016). Το Nrf2 ανέστειλε την μικρογλοιακή υπερενεργοποίηση καταστέλλοντας το MAPK p38 και το μονοπάτι σηματοδότησης NF-βB (Kim BW et al., 2013). Η πτώση του Nrf2 σε ποντίκια αποδείχθηκε ότι είναι υπερευαίσθητη στη νευροφλεγμονή, όπως υποδεικνύεται από την αύξηση των φλεγμονωδών δεικτών iNOS, IL-6 και TNF-β. (Rojo et al., 2010). Κατά συνέπεια, οι Nrf2 και HO-1 έχουν θεωρηθεί ως σημαντικοί θεραπευτικοί στόχοι για νευροεκφυλιστικές ασθένειες (Koh et al., 2011; Zhang et al., 2014).  

 

Η κουρκουμίνη, το κύριο κουρκουμινοειδές που απομονώθηκε από το Curcuma longa L. (κουρκουμάς) έχει χρησιμοποιηθεί για αιώνες στη Νοτιοανατολική Ασία τόσο ως φαρμακευτικό φάρμακο όσο και ως τροφή (Kunnumakkara et al., 2017). Η κουρκουμίνη, η δεμεθοξυκουρκουμίνη, η δισδεμεθοξυκουρκουμίνη, η αρ-τουρμερόνη, η β-τουρμερόνη και η β-τουρμερόνη είναι οι κύριες βιοδραστικές ενώσεις που βρίσκονται στο C. longa. Σε σύγχρονες φαρμακολογικές μελέτες, τα συστατικά του C. longa, ιδιαίτερα η κουρκουμίνη, έχουν δείξει πολλά υποσχόμενες φαρμακολογικές δράσεις λόγω των αντινευροφλεγμονωδών, νευροπροστατευτικών, χημειοπροληπτικών, ανοσοτροποποιητικών και δυνητικά χημειοθεραπευτικών επιδράσεών της (Garcia-Alloza et al., 2007; Zhou et al. 2017). Μια προηγούμενη μελέτη έδειξε ότι η κουρκουμίνη ανέστειλε τις επαγόμενες από το LPS φλεγμονώδεις αποκρίσεις σε μακροφάγα RAW264.7, υποδηλώνοντας πιθανό ρόλο της κουρκουμίνης στην αντι-Gram-αρνητική βακτηριακή λοίμωξη (Zhou et al., 2017) και η έρευνα in vivo και in vitro έχει δείξει ότι η κουρκουμίνη εμφανίζει αντιφλεγμονώδη αποτελέσματα (Garcia-Alloza et al., 2007; Prakobwong et al., 2011; Parada et al., 2015; Li et al., 2016). Επιπλέον, η κουρκουμίνη έχει επίσης αναφερθεί ότι προάγει την ανάπτυξη του μικρογλοιακού φαινοτύπου M2 με τρόπο που εξαρτάται από το HO-1 και μειώνει την επαγωγή iNOS, προστατεύοντας τα μικρογλοιακά κύτταρα από το οξειδωτικό στρες (Parada et al., 2015). Στην παρούσα μελέτη, διερευνήσαμε εάν η κουρκουμίνη θα μπορούσε να επηρεάσει την επαγόμενη από LTA μικρογλοιακή ενεργοποίηση. Ο συνδέτης TLR2 LTA είναι ένα κύριο συστατικό του κυτταρικού τοιχώματος των θετικών κατά Gram βακτηρίων. Δείχνουμε ότι η κουρκουμίνη επιδεικνύει αντιφλεγμονώδη και αντιοξειδωτικά αποτελέσματα σε μικρογλοία BV2 που διεγείρονται από LTA μέσω της ενεργοποίησης των κυτταροπροστατευτικών μηχανισμών HO-1/Nrf2/ARE.  

 

Υλικά και Μέθοδοι

Υλικά

Η κουρκουμίνη και άλλα αντιδραστήρια αγοράστηκαν από τη Sigma (C7727, >80%, St. Louis, ΜΟ, Ηνωμένες Πολιτείες). Πρωτοπορφυρίνη IX (SnPP) και αντισώματα που στρέφονται κατά του HO-1 (sc-390991) – Nrf2 (sc-722), πρωτεΐνη δέσμευσης TATA (TBP; sc-74595), α-τουμπουλίνη (sc-134237) και β-ακτίνη (sc-130065) – αγοράστηκαν από την Santa Cruz Biotechnology, Inc., (Dallas, TX, Ηνωμένες Πολιτείες). Αντισώματα που στρέφονται κατά του iNOS (13120) – φωσφορυλιωμένο (p)-MAPK (9910s), MAPK (9926), πρωτεϊνική κινάση Β (Akt; 4685), p-Akt (13038) και ένα κιτ μονοπατιού NF-βB (9936) – αγοράστηκαν από την Cell Signaling Technology, Inc., (Danvers, MA, Ηνωμένες Πολιτείες). Το LTA ελήφθη από την InvivoGen (tlrl-pslta, Τουλούζη, Γαλλία). Επιπροσθέτως, αγοράστηκαν αναστολέας JNK (JNK inhibitor II; 420119), αναστολέας Akt (wortmannin; 12-338), αναστολέας ERK (PD98059, 513000) και αναστολέας p38 (SB230580, 559395 από την United States, EMDiller, Millipore, Millipore) ). Το μέσο κυτταροκαλλιέργειας, DMEM, και εμβρυϊκός βόειος ορός (FBS) αγοράστηκαν από την Gibco BRL (τώρα Invitrogen Corporation, Carlsbad, CA, Ηνωμένες Πολιτείες).  

 

Κυτταρικής καλλιέργειας

Τα μικρογλοιακά κύτταρα BV-2 ποντικού αγοράστηκαν από την ATCC. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε DMEM συμπληρωμένο με 10% απενεργοποιημένο με θερμότητα FBS και 0.1% πενικιλλίνη-στρεπτομυκίνη (BioSource International, Camarillo, CA, Ηνωμένες Πολιτείες) στους 37°C σε μια υγροποιημένη ατμόσφαιρα 5% CO2 και 95% αέρα.  

 

Δοκιμασία βιωσιμότητας κυττάρων

Η κυτταροτοξικότητα της κουρκουμίνης αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας μια χρωματομετρική ανάλυση βασισμένη σε [3-(4,5-Διμεθυλθειαζολ-2-υλ)-2,5-διφαινυλτετραζόλιο βρωμίδιο] (ΜΤΤ). Τα κύτταρα επωάστηκαν σε πλάκες 24 φρεατίων σε πυκνότητα 5 χ 105 κύτταρα ανά φρεάτιο. Το διάλυμα ΜΤΤ (5 ml 5 mg/ml) προστέθηκε σε κάθε φρεάτιο (τελική συγκέντρωση 62.5 mg/ml). Μετά από επώαση για 3 ώρες στους 37°C σε 5% CO2, το υπερκείμενο αφαιρέθηκε και οι κρύσταλλοι φορμαζάνης που παράγονται σε βιώσιμα κύτταρα διαλυτοποιήθηκαν με 150 ml διμεθυλοσουλφοξειδίου (DMSO). Η απορρόφηση κάθε φρεατίου στη συνέχεια διαβάστηκε στα 570 nm χρησιμοποιώντας συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας (Wallac 1420; PerkinElmer, Inc., Boston, ΜΑ, Ηνωμένες Πολιτείες).  

 

Μέτρηση συγκέντρωσης νιτρωδών

Η σύνθεση ΝΟ σε κυτταροκαλλιέργειες μετρήθηκε με τη μέθοδο Griess με μικροπλάκα. Για τη μέτρηση των νιτρωδών, κλάσματα 100-βl αφαιρέθηκαν από το ρυθμισμένο μέσο και επωάστηκαν με ίσο όγκο του αντιδραστηρίου Griess [1% σουλφανιλαμίδιο/0.1%Ν-(1-ναφθυλ)-αιθυλενοδιαμινοδιυδροχλωρίδιο/2.5% H3PO4] σε θερμοκρασία δωματίου για 10 λεπτά. Η συγκέντρωση νιτρωδών προσδιορίστηκε με μέτρηση της απορρόφησης στα 540 nm με φασματοφωτόμετρο μικροπλάκας Vmax 96 φρεατίων (Molecular Devices, Menlo Park, CA, Ηνωμένες Πολιτείες). Ως πρότυπο χρησιμοποιήθηκε νιτρώδες νάτριο.  

 

Μέτρηση του TNF-? και συγκέντρωση PGE2

Τα κύτταρα επωάστηκαν πρώτα με διάφορες συγκεντρώσεις κουρκουμίνης για 1 ώρα και στη συνέχεια με LTA για 16 ώρες. Μετά από επώαση 24 ωρών, TNF-? και τα επίπεδα PGE2 ποσοτικοποιήθηκαν στο μέσο καλλιέργειας χρησιμοποιώντας κιτ ενζυμικής ανοσοπροσροφητικής δοκιμασίας (ELISA) (R&D Systems, Minneapolis, MN, Ηνωμένες Πολιτείες) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.  

 

Παρασκευή πυρηνικού εκχυλίσματος

Τα μικρογλοιακά κύτταρα BV-2 πλύθηκαν τρεις φορές με ψυχρό PBS και συλλέχθηκαν σε 3000 μΙ PBS χρησιμοποιώντας φυγοκέντρηση στα 800 χ g για 5 λεπτά (4°C). Τα σφαιρίδια κυττάρων εναιωρήθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα Α [10 mM HEPES-KOH (ρΗ 7.9). 1.5 mM MgCl2; 10 mM KCl; 0.5 mM διθειοθρεϊτόλη (DTT); 0.2 mM αναστολέας πρωτεάσης (ΡΙ)] και επωάστηκε για 5 λεπτά σε πάγο. Ρυθμιστικό διάλυμα Β [10 mM HEPES-KOH (ρΗ 7.9); 1.5 mM MgCl2; 420 mM NaCl; 0.2 mM EDTA; γλυκερίνη 25% v/v; 0.1 mM DTT; 0.2 mM ΡΙ] προστέθηκε στο εκχύλισμα κυττάρων και επωάστηκε σε πάγο για 5 λεπτά πριν από τη φυγοκέντρηση στα 11,000 χ g για 1 λεπτό στους 4°C. Οι πυρηνικές πρωτεΐνες εκχυλίστηκαν με την προσθήκη ρυθμιστικού διαλύματος πλήρους λύσης Β [10 mM HEPES-KOH (ρΗ 7.9). 1.5 mM MgCl2; 10 mM KCl; 0.5 mM DTT; 0.2 mM PI; 25% (β/ο) γλυκερίνη; 420 mM NaCl; 0.2 mM EDTA] για 30 λεπτά στους 4°C με περιστασιακό στροβιλισμό. Μετά από φυγοκέντρηση στα 11,000 χ g για 5 λεπτά στους 4°C, τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν και αποθηκεύτηκαν στους -70°C.  

 

Ανάλυση Western Blot

Τα κύτταρα BV-2 συλλέχθηκαν σε ένα παγωμένο ρυθμιστικό λύσης (1% Triton Χ-100, 1% δεοξυχολικό, 0.1% δωδεκυλοθειικό νάτριο). Η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη των προϊόντων λύσης κυττάρων προσδιορίστηκε στη συνέχεια χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο Bradford (Bio-Rad Protein Assay Kit I5000001; Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, Ηνωμένες Πολιτείες). Οι συνολικές πρωτεΐνες σε κάθε δείγμα (50 μg) διαχωρίστηκαν με 7.5% SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες διφθοριούχου πολυβινυλιδενίου. Μετά τον αποκλεισμό των μη ειδικών σημείων δέσμευσης με 5% άπαχο γάλα σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά, οι μεμβράνες επωάστηκαν με πρωτογενή αντισώματα που στρέφονται κατά iNOS (1:500), p-Akt (1:1,000), p- MAPK (1:1,000), MAPK (1:1,000), ρ-ρ65, ρ65 (1:500), ρΙΔΒβ, ΙΔΒ; (1:1,000), HO-1 (1:1,000), Nrf2 (1:1,000), TBP (1:3,000), ? (1:1,000), HO-1 (1:1.0) και ακτίνη (1:3,000) για 16 ώρες στους 4°C. Ακολούθησε επώαση με δευτερογενή αντισώματα αντι-κουνελιού (sc-2768; 1:5,000) ή αντι-ποντικού (sc-2371; 1:5,000) (Santa Cruz Biotechnology, Inc.) συζευγμένη με υπεροξειδάση χρένου (Santa Cruz Biotechnology, Inc.) σε θερμοκρασία δωματίου για 1 η. Η τουμπουλίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης για κάθε λωρίδα. Οι πρωτεΐνες οπτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα κιτ ανίχνευσης ενισχυμένης χημειοφωταύγειας (GE Healthcare, Σικάγο, IL, Ηνωμένες Πολιτείες). Μετά από πλύση με PBS με Tween-20, οι πρωτεϊνικές ζώνες οπτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το Gel Docsed ως τον έλεγχο φόρτωσης για κάθε λωρίδα. Οι πρωτεΐνες οπτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας έναν αναλυτή Quant 350 (GE Healthcare).  

 

RT-PCR σε πραγματικό χρόνο

Ολικό RNA απομονώθηκε από κύτταρα χρησιμοποιώντας κιτ απομόνωσης RNA spin miniRNA (GE Healthcare, Uppsala, Σουηδία) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Το cDNA συντέθηκε από 1 μg ολικού RNA χρησιμοποιώντας Maxime RT PreMix (Takara, Gyeonggi-do, Ιαπωνία) και αγκυρωμένους ολιγο-dT15-εκκινητές. Πραγματοποιήθηκε PCR σε πραγματικό χρόνο χρησιμοποιώντας ένα όργανο Chromo4TM (Bio-Rad) και SYBR Green Master Mix (Applied Biosystems, Foster City, CA, Ηνωμένες Πολιτείες). Οι σχετικές ποσότητες mRNA στόχου προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας τη μέθοδο του συγκριτικού κατωφλίου (Ct) με κανονικοποίηση των τιμών του mRNA Ct στόχου σε εκείνες για την α-ακτίνη (Ct). Οι πρωταρχικές αλληλουχίες που χρησιμοποιήθηκαν στη μελέτη φαίνονται στον Πίνακα δ1.  

 

 

Στατιστική ανάλυση

Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος (τυπική απόκλιση, SD). Κάθε πείραμα επαναλήφθηκε τουλάχιστον τρεις φορές. Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό Statistical Package for GraphPad Prism (έκδοση 16.0) για τον προσδιορισμό σημαντικών διαφορών. Χρησιμοποιήσαμε είτε το Student's t-test είτε την μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης (ANOVA) ακολουθούμενη από τα post hoc τεστ Dunn για αναλύσεις. Οι τιμές P < 0.05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές.  

 

Αποτελέσματα

Η κουρκουμίνη δεν επηρέασε τη βιωσιμότητα των κυττάρων

Πραγματοποιήθηκαν πειράματα βιωσιμότητας κυττάρων για να προσδιοριστεί εάν οι συγκεντρώσεις της κουρκουμίνης που χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη επηρέασαν τη βιωσιμότητα των μικρογλοίων BV2. Το σχήμα α1 δείχνει ότι η κουρκουμίνη στο εύρος συγκέντρωσης 5-20 μΜ, μαζί με ή χωρίς 5 μg/ml LTA, δεν προκάλεσε κυτταροτοξικότητα στα μικρογλοία BV2. Ως εκ τούτου, χρησιμοποιήσαμε αυτές τις συγκεντρώσεις κουρκουμίνης για περαιτέρω μελέτη.  

 

 

Η κουρκουμίνη εμπόδισε την παραγωγή νευροφλεγμονωδών μορίων σε μικρογλοία BV2 ενεργοποιημένη με LTA

Για τη διερεύνηση των επιδράσεων της κουρκουμίνης στην έκκριση φλεγμονωδών κυτοκινών, τα κύτταρα BV2 υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με LTA παρουσία και απουσία κουρκουμίνης για 24 ώρες. Η κουρκουμίνη δεν αφαιρέθηκε πριν από την προσθήκη LTA. Απελευθέρωση ΝΟ, PGE2 και TNF-? μειώθηκαν σημαντικά και δοσοεξαρτώμενα από την κουρκουμίνη (Εικόνες 2A-C). Επιπλέον, το LTA αύξησε την έκφραση mRNA των iNOS και COX-2. Η επώαση με κουρκουμίνη κατέστειλε την έκφραση mRNA του COX-2 και του iNOS σε μικρογλοιακά κύτταρα BV2 που διεγείρονται από LTA με τρόπο εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση (Εικόνες 2D, E).  

 

 

Η κουρκουμίνη καταστέλλει την επαγόμενη από LTA ενεργοποίηση του NF-βB σε μικρογλοιακά κύτταρα BV-2

Τα γονίδια που κωδικοποιούν την έκφραση της φλεγμονώδους πρωτεΐνης σε απόκριση στη μικρογλοιακή ενεργοποίηση ήταν υπό τον μεταγραφικό έλεγχο του ΝΡ-κΒ. Επομένως, εξετάσαμε την επίδραση της κουρκουμίνης στην ενεργοποίηση του ΝΡ-κΒ σε διεγερμένα από LTA μικρογλοιακά κύτταρα. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το LTA προκάλεσε μια χαρακτηριστική αύξηση στη φωσφορυλίωση του ΙβΒβ. Μετά την προκαταρκτική θεραπεία με κουρκουμίνη, τα επίπεδα pI?B? μειώθηκαν σημαντικά με τρόπο που εξαρτάται από τη συγκέντρωση (Εικόνα δ3 και Συμπληρωματικό Σχήμα S1). Με συνέπεια, η πυρηνική μετατόπιση της υπομονάδας ΝΡ-κΒ ρ65 που επάγεται από LTA εξασθενήθηκε επίσης με προκατεργασία με κουρκουμίνη. Συνολικά, η κουρκουμίνη πιθανώς εξασθενεί την έκφραση νευροφλεγμονωδών μορίων καταστέλλοντας την πυρηνική μετατόπιση και ενεργοποίηση του NF-βB. Ως υποστηρικτικά δεδομένα δόθηκε ποσοτικοποίηση με στατιστική ανάλυση.  

 

 

Η κουρκουμίνη ανέστειλε την επαγόμενη από LTA ενεργοποίηση του p38 και το ERK MAPK σε μικρογλοιακά κύτταρα BV-2

Εκτός από τον NF-κB, τα MAPKs είναι επίσης ανοδικοί ρυθμιστές νευροφλεγμονωδών μορίων σε μικρογλοιακά κύτταρα. Προηγούμενες μελέτες έδειξαν ότι η κουρκουμίνη ανταγωνίζεται τη φωσφορυλίωση των MAPKs που προκαλείται από LPS σε μικροφάγο (Yang et al., 2008; Kunnumakkara et al., 2017). Για να διερευνήσουμε εάν η κουρκουμίνη αναστέλλει τη νευροφλεγμονή μέσω της ρύθμισης των MAPKs, εξετάσαμε τα αποτελέσματά της στη φωσφορυλίωση MAPK που προκαλείται από LTA. Τα μικρογλοιακά κύτταρα BV-2 υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις κουρκουμίνης για 3 ώρες και στη συνέχεια διεγέρθηκαν με LTA για 1 ώρα. Όπως φαίνεται στο Σχήμα δ4Α και στο Συμπληρωματικό Σχήμα S2, η κουρκουμίνη ανέστειλε την επαγόμενη από LTA ERK, ρ38 και φωσφορυλίωση Akt. Ωστόσο, έως και 20 μΜ κουρκουμίνη δεν επηρέασε την επαγόμενη από LTA φωσφορυλίωση JNK. Η οδός MAPKs έχει αναφερθεί ότι μεσολαβεί στην παραγωγή κυτοκινών, χημειοκίνης και άλλων νευροφλεγμονωδών μορίων. Επομένως, στη συνέχεια διερευνήσαμε τον ρόλο των ERK, p38, JNK και Akt στην παραγωγή νευροφλεγμονωδών μορίων των κυττάρων BV2 χρησιμοποιώντας τους αναστολείς ERK, p38, JNK και Akt. Ωστόσο, μόνο ο αναστολέας ρ38 SB203580 μείωσε σημαντικά την επαγόμενη από LTA απελευθέρωση του ΝΟ και τα επίπεδα έκφρασης mRNA του iNOS (Εικόνες 4Β, Γ). Αν και η φωσφορυλίωση της JNK δεν ανεστάλη από την κουρκουμίνη, ο αναστολέας JNK II ανέστειλε σημαντικά την επαγόμενη από LTA απελευθέρωση ΝΟ (Εικόνα δ4Β). Τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι τα μονοπάτια σηματοδότησης των MAPK εμπλέκονται στις αντινευροφλεγμονώδεις επιδράσεις της κουρκουμίνης σε μικρογλοιακά διεγερμένα από LTA. Η ποσοτικοποίηση με στατιστική ανάλυση παρέχεται ως υποστηρικτικά δεδομένα.  

 

 

Η αναστολή της σηματοδότησης HO-1 Κατάργησε την ανασταλτική επίδραση της κουρκουμίνης στις νευροφλεγμονώδεις αποκρίσεις

Το HO-1 δρα ως αντιφλεγμονώδης και αντιοξειδωτικός ρυθμιστής στη μικρογλοία (Schipper et al., 2009). Οι αναλύσεις Western blot και RT-PCR έδειξαν ότι η κουρκουμίνη ρύθμισε προς τα πάνω την έκφραση HO-1 στα επίπεδα πρωτεΐνης και mRNA, όπως φαίνεται στα Σχήματα 5A-D και στο Συμπληρωματικό Σχήμα S3. Η έκφραση του HO-1 mRNA και της πρωτεΐνης αυξήθηκε στο μέγιστο σε BV-2 μικρογλοιακά κύτταρα που υποβλήθηκαν σε αγωγή με κουρκουμίνη 20μ για 4 ώρες και 8 ώρες αντίστοιχα. Επιπλέον, η κουρκουμίνη αύξησε την πυρηνική μετατόπιση του Nrf2 μέσα σε 1 ώρα και παρέτεινε την κατάσταση πυρηνικής μετατόπισής του σε 2 ώρες (Εικόνες 5Ε, ΣΤ και Συμπληρωματικό Σχήμα S3). Στη συνέχεια, διερευνήσαμε εάν το HO-1 που προκαλείται από την κουρκουμίνη μεσολάβησε σε μια αντινευροφλεγμονώδη απόκριση σε μικρογλοιακά κύτταρα BV-2 που διεγείρονται από LTA. Αντιμετωπίσαμε κύτταρα με τον αναστολέα HO-1 SnPP. Στη συνέχεια αξιολογήσαμε την επίδραση της κουρκουμίνης στο ΝΟ και το TNF-α που προκαλείται από LTA. ελευθέρωση. Η θεραπεία με SnPP κατέστειλε σημαντικά την προκαλούμενη από κουρκουμίνη αναστολή της απελευθέρωσης NO και TNF-a (Εικόνες 5G, H). Συνολικά, αυτά τα αποτελέσματα αποκαλύπτουν ότι η εξαρτώμενη από την κουρκουμίνη ενεργοποίηση σημάτων HO-1 και Nrf-2 διαδραματίζει κρίσιμο ρόλο στη μείωση των νευροφλεγμονωδών αποκρίσεων. Η ποσοτικοποίηση με στατιστική ανάλυση παρέχεται ως υποστηρικτικά δεδομένα.  

 

 

Ερωτήσεις - Συζήτηση

Η μικρογλοία, οι κύριοι μόνιμοι μακροφάγοι του ΚΝΣ, έχει αναφερθεί ότι είναι τα κύρια τελεστικά κύτταρα στη μεσολάβηση της νευροφλεγμονής και του εκλεκτικού νευρωνικού θανάτου (Perry et al., 2010). Τα μικρογλοιακά κύτταρα αυξάνουν την παραγωγή νευροφλεγμονωδών μορίων μετά από έκθεση σε ενεργοποιητές όπως το LPS και το LTA μέσω των επιφανειακών υποδοχέων τους, TLR4 και TLR2, αντίστοιχα (Perry and Holmes, 2014; Hossain et al., 2017). Η αυξημένη έκφραση και ενεργοποίηση του TLR2 σχετίζεται με την εξέλιξη νευροεκφυλιστικών ασθενειών, όπως η PD και η άνοια (Dzamko et al., 2017). Για παράδειγμα, η ενεργοποίηση του TLR2 θα μπορούσε να ρυθμίσει προς τα πάνω την α-συνουκλεΐνη στους εγκεφάλους με PD και να παίξει σημαντικό ρόλο στην παθογένεση των εγκεφάλων PD (Roodveldt et al., 2013). Επιπλέον, οι Kim C. et al. (2013) έδειξε επίσης ότι ο νευροεκφυλισμός μετριάστηκε είτε με νοκ-άουτ είτε με νοκ ντάουν του TLR2 σε μοντέλα PD τρωκτικών. Έτσι, ο έλεγχος της ενεργοποίησης της μικρογλοίας με τη μεσολάβηση TLR2 και της νευροτοξικότητας έχει προταθεί ως σημαντική θεραπευτική προσέγγιση για τη θεραπεία νευροεκφυλιστικών ασθενειών. Ένας πιθανός παράγοντας σε αυτή τη διαδικασία θα μπορούσε να είναι η κουρκουμίνη, η οποία έχει αποδειχθεί ότι ασκεί νευροπροστατευτικά και αντιφλεγμονώδη αποτελέσματα σε διάφορα πειραματικά μοντέλα (Parada et al., 2015; Li et al., 2016). Η κουρκουμίνη είναι μια εξαιρετικά λιπόφιλη φυσική ένωση. Μια προηγούμενη μελέτη έχει δείξει καλά ότι η κουρκουμίνη είναι σε θέση να διασχίσει τον αιματοεγκεφαλικό φραγμό και ότι συγκεντρώνεται κυρίως στον ιππόκαμπο του εγκεφάλου (Tsai et al., 2011). Ορισμένες μελέτες ανέφεραν ότι η κουρκουμίνη ανέστειλε τη νευρωνική βλάβη που προκαλείται από το HIV-1 gp120 και παρείχε αντινευροφλεγμονώδη αποτελέσματα σε μικρογλοία που προκαλείται από LPS (Gong et al., 2012). Αυτή η προστατευτική δράση της κουρκουμίνης φαίνεται να εξαρτάται από τις αντιφλεγμονώδεις δράσεις της. Η κουρκουμίνη θα μπορούσε να προστατεύσει τους νευρώνες από τη νευροτοξικότητα που προκαλείται από μικρογλοία ενώ καθίσταται αναποτελεσματική υπό συνθήκες εξάντλησης μικρογλοίας (Park et al., 2001; Yang et al., 2008; Parada et al., 2015). Παρόμοιες μελέτες σε περιφερικά κύτταρα έδειξαν επίσης τις αντιφλεγμονώδεις επιδράσεις της κουρκουμίνης. Χρησιμοποιώντας μακροφάγους ποντικού RAW 264.7, μελέτες έχουν δείξει ότι η κουρκουμίνη ανέστειλε τα PGE2, NO και TNF-β. απελευθέρωση μετά από διέγερση LPS (Pae et al., 2008). Ωστόσο, οι επιδράσεις της κουρκουμίνης στην επαγόμενη από το TLR2 νευροφλεγμονή σε μικρογλοιακά κύτταρα δεν είναι πλήρως κατανοητές.  

 

Η ρύθμιση των οδών σηματοδότησης στην ενεργοποιημένη μικρογλοία είναι σημαντική για τη διατήρηση της ομοιόστασης του ΚΝΣ, επειδή οι απορυθμισμένες νευροφλεγμονώδεις αποκρίσεις μπορεί να οδηγήσουν στο θάνατο γειτονικών νευρώνων μέσω της απελευθέρωσης φλεγμονωδών μορίων, όπως κυτοκίνες, χημειοκίνες, ΝΟ και ROS (Perry and Holmes, 2014; Spangenberg και Green, 2017). Για παράδειγμα, η υπερβολική σύνθεση ΝΟ κάτω από ενδοτοξίνες έχει ως αποτέλεσμα το σχηματισμό δραστικών ειδών αζώτου και τον θάνατο των νευρωνικών κυττάρων (Perry et al., 2010). Η PGE2 έχει επίσης αποδειχθεί ότι συμβάλλει στον νευρωνικό θάνατο μέσω της ενεργοποίησης της οδού MAPK/ERK στη μικρογλοία (Xia et al., 2015). Σε αυτήν την παρούσα μελέτη, δείξαμε ότι η κουρκουμίνη ανέστειλε την έκκριση των φλεγμονωδών μεσολαβητών TNF-α, ΝΟ και PGE2 και την έκφραση iNOS και COX-2 σε μικρογλοία BV2 που διεγείρεται με LTA. Περαιτέρω δείξαμε ότι η κουρκουμίνη εξασθένησε αυτές τις επιδράσεις του LTA χωρίς να μεταβάλλει την κυτταρική επιβίωση, υποδηλώνοντας ότι η κουρκουμίνη είναι ασφαλής και θα μπορούσε να θεωρηθεί ως ένας πιθανός θεραπευτικός παράγοντας στη νευροφλεγμονή.  

 

Ο ΝΡ-κΒ είναι ο κύριος μεταγραφικός παράγοντας που παίζει κρίσιμους ρόλους στη ρύθμιση της ομοιόστασης οξειδοαναγωγής. Ο NF-κB θεωρείται ο κύριος ρυθμιστής των μικρογλοιακών φλεγμονωδών αποκρίσεων σε νευρωνική βλάβη (Acharyya et al., 2007). Πρόσφατες μελέτες έδειξαν ότι η ενεργοποίηση NF-βB έλεγχε την έκφραση φλεγμονωδών μορίων, όπως το ΝΟ, PGE2 και TNF-α, και την παραγωγή IL-1b (Acharyya et al., 2007). Επομένως, η τροποποίηση της ενεργοποίησης του NF-κB θεωρείται ένας κρίσιμος τρόπος για τον έλεγχο της μικρογλοιακής ενεργοποίησης. Η ενεργοποίηση της οδού σηματοδότησης ΝΡ-κΒ μεσολαβείται από την πρωτεΐνη ΙβΒ. Η φωσφορυλίωση του ΙβΒ οδηγεί σε διάσταση ΝΡ-κΒ, που οδηγεί στην επαγωγή φλεγμονωδών μεσολαβητών. Σε αυτή τη μελέτη, αποδείχθηκε ότι η κουρκουμίνη προκάλεσε διπλή αναστολή της φωσφορυλίωσης και αποικοδόμησης του ΙβΒβ, καθώς και πυρηνική μετατόπιση του ρ65, υποδηλώνοντας ότι αυτός ο παράγοντας θα μπορούσε να σταθεροποιήσει τον NF-κB στο μικρογλοιακό κυτταρόπλασμα μετά από διέγερση με LTA στο BV -2 μικρογλοιακά κύτταρα.  

 

Στα κύτταρα θηλαστικών, τα μονοπάτια σηματοδότησης MAPKs, συμπεριλαμβανομένων των ERK, JNK και p38, συμβάλλουν στην παραγωγή μιας ευρείας ποικιλίας νευροφλεγμονωδών μεσολαβητών (Chantong et al., 2014). Σε αυτήν την παρούσα μελέτη, η προ-αγωγή με κουρκουμίνη μείωσε τη φωσφορυλίωση του p38 και του ERK. Επιπλέον, ο αναστολέας ρ38 SB203580 μείωσε σημαντικά την έκκριση ΝΟ και την έκφραση mRNA του βασικού προφλεγμονώδους γονιδίου, iNOS. Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι η κουρκουμίνη ξεκίνησε τις αντινευροφλεγμονώδεις επιδράσεις στα διεγερμένα από LTA μικρογλοιακά κύτταρα BV-2, εν μέρει μέσω της αναστολής της ενεργοποίησης της p38 MAPK. Η εξαρτώμενη από το PI3K/Akt μονοπάτι σηματοδότησης προάγει τις φλεγμονώδεις αποκρίσεις στη μικρογλοία. Η εμπλοκή της οδού Akt έχει αποδειχθεί στην έκφραση φλεγμονωδών μεσολαβητών σε μικρογλοία μέσω της ενεργοποίησης του NF-βB στη μικρογλοία (Lo et al., 2015). Η κουρκουμίνη κατέστειλε το φωσφορυλιωμένο Akt, τον κατάντη στόχο του PI3K. Ωστόσο, ο αναστολέας PI3K wortmannin δεν έδειξε καμία ανασταλτική επίδραση στην έκκριση ΝΟ ή στην έκφραση mRNA του iNOS. Συνολικά, αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι η αντινευροφλεγμονώδης δράση της κουρκουμίνης εμφανίζεται κυρίως μέσω της αναστολής της σηματοδότησης NF-κB και MAPKs.  

 

Προσδιορίσαμε επίσης την ενδοκυτταρική οδό που ρυθμίζει αρνητικά την έκφραση του φλεγμονώδους μορίου στα μικρογλοιακά κύτταρα. Το Nrf2 είναι ένας ευαίσθητος στην οξειδοαναγωγή μεταγραφικός παράγοντας που ρυθμίζει τις μικρογλοιακές φλεγμονώδεις αποκρίσεις σε εγκεφαλικές λοιμώξεις. Η επίδραση του Nrf2 έχει περιγραφεί σε διαφορετικά μοντέλα in vivo όπου η μείωση του Nrf2 σε ποντίκια ενίσχυσε την ευαλωτότητα στο άσθμα ή το εμφύσημα (Ma, 2013). Επιπλέον, ο αγωνιστής TLR2/TLR4 προώθησε φλεγμονώδεις αποκρίσεις σε ποντικούς Nrf2 KO σε σύγκριση με ποντίκια WT (Kong et al., 2011). Στην τρέχουσα μελέτη, δείξαμε ότι η κουρκουμίνη αύξησε την έκφραση του Nrf2 και της κατάντη πρωτεΐνης του HO-1. Το HO-1 είναι ένα βασικό μόριο σηματοδότησης που εμπλέκεται στη ρύθμιση των φλεγμονωδών και οξειδωτικών αποκρίσεων. Το γονίδιο HO-1 έχει μια αλληλουχία ARE στην περιοχή προαγωγέα του, η οποία είναι μια θέση δέσμευσης για τον μεταγραφικό παράγοντα Nrf2. Αρκετές μελέτες έχουν προτείνει ότι το NF-κB διακόπτει τη οδό σηματοδότησης Nrf-2-ARE επειδή πολλές ενώσεις που προκάλεσαν σηματοδότηση HO-1 και Nrf2 κατέστειλαν τυχαία την ενεργοποίηση NF-βB (Li et al., 2016). Η έκφραση HO-1 ήταν απαραίτητη για το ειδικό κυτταροπροστατευτικό αποτέλεσμα των μικρογλοίων (Parada et al., 2015). Αρκετές μελέτες έχουν δείξει επίσης μια αντίστροφη συσχέτιση μεταξύ του HO-1 και της έκκρισης του φλεγμονώδους μεσολαβητή (Chora et al., 2007; Parada et al., 2015). Σε συμφωνία, παρατηρήσαμε ότι η κουρκουμίνη από μόνη της προκάλεσε την έκφραση του HO-1 σε μικρογλοιακά κύτταρα. Επιπλέον, ο αναστολέας HO-1 ακύρωσε την αντιφλεγμονώδη δράση της κουρκουμίνης στα μικρογλοιακά κύτταρα BV-2.  

 

Συμπέρασμα

Αυτή η μελέτη έδειξε ότι η κουρκουμίνη είχε αντιφλεγμονώδη δράση σε διεγερμένα από LTA μικρογλοιακά κύτταρα που μπορεί μέσω της αναστολής της ενεργοποίησης του NF-κB και της ρ38 MAPK και μπορεί να επάγει την έκφραση των Nrf2 και HO-1 (Εικόνα δ6). Επιπλέον, η κουρκουμίνη δεν έχει κυτταροτοξικά αποτελέσματα στα μικρογλοιακά κύτταρα BV-2 στην αντιφλεγμονώδη δόση της. Η κουρκουμίνη μπορεί να έχει θεραπευτική δυνατότητα για ορισμένες διαταραχές που σχετίζονται με νευροφλεγμονή που προκαλούνται από θετικά κατά Gram βακτήρια.  

 

 

Η κουρκουμίνη, ή ο κουρκουμάς, είναι ένα ισχυρό αντιφλεγμονώδες που έχει αποδειχθεί ότι έχει πολλά οφέλη για την υγεία. Θεωρούμενη ως αντιοξειδωτικό με αντικαρκινικές, αντικαταθλιπτικές και αντιγηραντικές ιδιότητες, η κουρκουμίνη μπορεί να κάνει πολύ περισσότερα από την επούλωση πληγών και την ενίσχυση της μνήμης. Σύμφωνα με ερευνητικές μελέτες, η κουρκουμίνη ή ο κουρκουμάς μπορούν να βοηθήσουν στη μείωση της νευροφλεγμονής ή της φλεγμονής του εγκεφάλου. Αυτό το ισχυρό αντιφλεγμονώδες μπορεί να εμποδίσει την παραγωγή προφλεγμονωδών κυτοκινών και να προάγει τη συνολική ευεξία. – Dr. Alex Jimenez DC, CCST Insight

 

---

 

Φόρμα αξιολόγησης των νευροδιαβιβαστών

 

Το ακόλουθο έντυπο αξιολόγησης νευροδιαβιβαστών μπορεί να συμπληρωθεί και να παρουσιαστεί στον Δρ. Alex Jimenez. Τα συμπτώματα που αναφέρονται σε αυτό το έντυπο δεν προορίζονται να χρησιμοποιηθούν ως διάγνωση οποιουδήποτε τύπου ασθένειας, πάθησης ή οποιουδήποτε άλλου είδους ζητήματος υγείας.  

 

---

 

Προς τιμήν της διακήρυξης του κυβερνήτη Abbott, ο Οκτώβριος είναι Χειροπρακτικός Μήνας Υγείας. Μάθε περισσότερα για Η πρόταση.  

 

Πόσο συχνά αισθάνεστε ταραγμένοι, εύκολα αναστατωμένοι και νευρικοί μεταξύ των γευμάτων; Πόσο συχνά εξαρτάστε από τον καφέ για να συνεχίσετε; Πόσο συχνά δυσκολεύεστε να συγκεντρωθείτε πριν φάτε; Η φλεγμονή είναι μια σημαντική αντίδραση του ανθρώπινου σώματος. Ενεργοποιείται από το ανοσοποιητικό σύστημα για να μας προστατεύει από τραυματισμούς, λοιμώξεις ή/και ασθένειες. Ωστόσο, τι συμβαίνει εάν υπάρχει υπερβολική φλεγμονή στο ανθρώπινο σώμα; Και, τι συμβαίνει εάν υπάρχει υπερβολική φλεγμονή στον εγκέφαλο;

 

Η φλεγμονή του εγκεφάλου μπορεί να προκαλέσει μια ποικιλία προβλημάτων υγείας, όπως άγχος, στρες, κατάθλιψη, εγκεφαλική ομίχλη, κόπωση, ακόμη και λήθαργο, μεταξύ άλλων κοινών συμπτωμάτων. Ευτυχώς, υπάρχει μια φυσική θεραπεία που μπορεί να βοηθήσει σημαντικά στη μείωση της νευροφλεγμονής και στη βελτίωση της λειτουργίας του εγκεφάλου. Σύμφωνα με ερευνητικές μελέτες, η κουρκουμίνη μπορεί να καταπολεμήσει τη φλεγμονή του εγκεφάλου. Ο σκοπός του παραπάνω άρθρου ήταν να συζητήσει τις αντιφλεγμονώδεις επιδράσεις της κουρκουμίνης στη μικρογλοία και την ευημερία του εγκεφάλου  

 

Το παρακάτω άρθρο έχει γίνει αναφορά από το Εθνικό Κέντρο Πληροφοριών Βιοτεχνολογίας (NCBI). Το εύρος των πληροφοριών μας περιορίζεται σε θέματα χειροπρακτικής, μυοσκελετικής και νευρικής υγείας ή σε άρθρα, θέματα και συζητήσεις λειτουργικής ιατρικής. Χρησιμοποιούμε λειτουργικά πρωτόκολλα υγείας για την αντιμετώπιση τραυματισμών ή διαταραχών του μυοσκελετικού συστήματος. Για να συζητήσετε περαιτέρω το θέμα παραπάνω, μη διστάσετε να ρωτήσετε τον Δρ Alex Jimenez ή να επικοινωνήσετε μαζί μας στο 915-850-0900 .  

 

Επιμελείται από τον Δρ Alex Jimenez  

 

 

---

 

Πρόσθετη συζήτηση θεμάτων: Χρόνιος πόνος

Ο ξαφνικός πόνος είναι μια φυσική αντίδραση του νευρικού συστήματος που βοηθά να αποδειχθεί πιθανός τραυματισμός. Ως παράδειγμα, τα σήματα πόνου ταξιδεύουν από μια τραυματισμένη περιοχή μέσω των νεύρων και του νωτιαίου μυελού στον εγκέφαλο. Ο πόνος είναι γενικά λιγότερο σοβαρός καθώς ο τραυματισμός θεραπεύει, ωστόσο ο χρόνιος πόνος είναι διαφορετικός από τον μέσο τύπο πόνου. Με χρόνιο πόνο, το ανθρώπινο σώμα θα συνεχίσει να στέλνει σημάδια πόνου στον εγκέφαλο, ανεξάρτητα από το αν ο τραυματισμός έχει θεραπευτεί. Ο χρόνιος πόνος μπορεί να διαρκέσει αρκετές εβδομάδες έως και αρκετά χρόνια. Ο χρόνιος πόνος μπορεί να επηρεάσει τεράστια την κινητικότητα του ασθενούς και μπορεί να μειώσει την ευελιξία, τη δύναμη και την αντοχή.

 

 

---

 

Neural Zoomer Plus για νευρολογική ασθένεια

 

Ο Δρ Alex Jimenez χρησιμοποιεί μια σειρά από δοκιμές για να βοηθήσει στην αξιολόγηση νευρολογικών ασθενειών. Ο Νευρωνικός Ζωομετρικός^TM Το Plus είναι μια σειρά από νευρολογικά αυτοαντισώματα που προσφέρει ειδική αναγνώριση αντισώματος προς αντιγόνο. Το ζωηρό νευρικό ζουμερ^TM Το Plus έχει σχεδιαστεί για να αξιολογεί την αντιδραστικότητα ενός ατόμου σε 48 νευρολογικά αντιγόνα με συνδέσεις με μια ποικιλία νευρολογικά σχετικών ασθενειών. Το ζωηρό νευρικό ζουμερ^TM Plus στοχεύει στη μείωση των νευρολογικών παθήσεων, ενισχύοντας τους ασθενείς και τους ιατρούς με έναν ζωτικής σημασίας πόρο για την έγκαιρη ανίχνευση κινδύνου και μια αυξημένη εστίαση στην εξατομικευμένη πρωτογενή πρόληψη.  

 

Τύποι υποστήριξης μεθυλίωσης

 

XYMOGEN's Οι αποκλειστικές επαγγελματικές φόρμουλες διατίθενται μέσω ειδικευμένων επαγγελματιών υγείας. Η πώληση και η προεξόφληση των προϊόντων XYMOGEN στο διαδίκτυο απαγορεύονται αυστηρά.

 

Με καμάρι, Δρ. Αλέξανδρος Χιμένεζ κάνει τους τύπους XYMOGEN διαθέσιμοι μόνο σε ασθενείς υπό τη φροντίδα μας.

 

Παρακαλούμε να καλέσετε το γραφείο μας για να μπορέσουμε να αναθέσουμε ιατρική συμβουλή για άμεση πρόσβαση.

 

Εάν είστε ασθενής Ιατρική & Χειροπρακτική Κλινική, μπορείτε να ζητήσετε πληροφορίες σχετικά με το XYMOGEN καλώντας 915-850-0900.

 

Για την ευκολία σας και την αναθεώρηση του XYMOGEN προϊόντα παρακαλούμε διαβάστε τον παρακάτω σύνδεσμο. *XYMOGEN-Κατάλογος-Λήψη  

 

* Όλες οι παραπάνω πολιτικές του XYMOGEN παραμένουν αυστηρά σε ισχύ.